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REVISTA BRASILEIRA DE REUMATOLOGIA
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Artigo original
Polimorfismos dos genes metilenotetrahidrofolato redutase, fator de crescimento transformador $1 e linfotoxina-a e susceptibilidade a artrite reumatoide
Olfat G. Shakera, Amina M. Alnouryb'c, Gehan A. Hegazyb'd, Hemmat E. El Haddade, Safaa Sayedf e Ahmed Hamdye'*
a Departamento de Bioquímica Médica e Biologia Molecular, Faculdade de Medicina, Cairo University, Cairo, Egito b Departamento de Bioquímica Clínica, Faculdade de Medicina, King Abdulaziz University, Jeddah, Arábia Saudita c Departamento de KSA & Bioquímica Médica, Faculdade de Medicina, Ain Shams University, Cairo, Egito d Departamento de KSA & Bioquímica Médica, National Research Center, Cairo, Egito e Departamento de Medicina Interna, Faculdade de Medicina, Cairo University, Cairo, Egito f Departamento de Reumatologia & Reabilitacao, Faculdade de Medicina, Cairo University, Cairo, Egito
informaqoes sobre o artigo
resumo
Histórico do artigo:
Recebido em 17 de outubro de 2015 Aceito em 16 de margo de 2016 On-line em xxx
Palavras-chave: Artrite reumatoide Polimorfismo genético MTHFR C677T e A1298 C TGF-ß1 T869 C LT-a A252G
Antecedentes: A artrite reumatoide é uma doenca autoimune amplamente prevalente com sugerida predisposicao genética.
Objetivos:Detectar o padrao de polimorfismo dos genes metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR C677T e A1298 C), fator de crescimento transformador (31 (TGF-(1 T869C) e linfotoxina-a (LT-a A252G) em pacientes com artrite reumatoide e correlacionar esses padroes com a atividade da doenca e os níveis séricos de fator de necrose tumoral alfa (TNF-a), fator ativador de linfócitos B (BAFF) e osteopontina.
Métodos:Foram genotipados 194 individuos - 90 controles e 104 com artrite reumatoide - á procura de polimorfismos dos genes MTHFR C677T e A1298 C, TGF-(1 T869 C e LT-a A252G com uma metodología baseada na PCR-RFLP. Mensuraram-se também os níveis séricos de TNF-a, osteopontina e BAFF com kits de Elisa.
Resultados:O genótipo CT e o alelo T do MTHFR C677T e o genótipo GG e alelo G do LT-a A252G estao associados ao risco de AR e a níveis mais elevados da citocina pró-inflamatória TNF-a em pacientes com artrite reumatoide.
Condusao:Os achados do presente estudo sugerem que há associacao entre os polimorfismos dos genes MTHFR C677T e LT-a A252G e um risco aumentado de AR nessa amostra da populacao egipcia.
© 2016 Elsevier Editora Ltda. Este é um artigo Open Access sob a licenga de CC BY-NC-ND
(http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).
* Autor para correspondencia. E-mail: ahramadan777@gmail.com (A. Hamdy). http://dx.doi.org/10.10167j.rbr.2016.03.005
0482-5004/© 2016 Elsevier Editora Ltda. Este é um artigo Open Access sob a licenga de CC BY-NC-ND (http://creativecommons.org/ licenses/by-nc-nd/4.0/).
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Methylene tetrahydrofolate reductase, transforming growth factor-pi and lymphotoxin-a genes polymorphisms and susceptibility to rheumatoid arthritis
abstract
Keywords:
Rheumatoid arthritis Gene polymorphism MTHFR C677 T and A1298 C TGF-[31 T869C LT-a A252G
Bacfeground:Rheumatoid arthritis is a widely prevalent autoimmune disorder with suggested genetic predisposition.
Objectives: The aim of this study is to detect the pattern of genetic polymorphism of methylene tetrahydrofolate reductase (MTHFR C677 T and A1298 C), transforming growth factor-pi (TGF- pi T869 C) and lymphotoxin-a (LT-a A252G) in patients having rheumatoid arthritis and correlate these patterns to disease activity and serum levels of tumor necrosis factor-alpha (TNF-a), B-Cell Activating Factor (BAFF), and osteopontin.
Methods: A total of 194 subjects, 90 controls and 104 patients with rheumatoid arthritis were genotyped for MTHFR C677T and A1298C, TGF-pi T869C and LT-a A252G polymorphisms using a methodology based on PCR-RFLP. Also serum levels of TNF-a, osteopontin and BAFF were measured by ELISA kits.
Results:The CT genotype and T allele of MTHFR C677 T and GG genotype and G allele of LT--a A252G are associated with the risk of RA and with higher levels of the pro-inflammatory cytokine, TNF-a in patients with rheumatoid arthritis.
ConcIusion:Our findings suggest that there is association between MTHFR C677T and LT-a A252G genes polymorphisms and increased risk of RA in this sample of Egyptian population. © 2016 Elsevier Editora Ltda. This is an open access article under the CC BY-NC-ND license (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).
Introdugáo
A artrite reumatoide (AR) é uma doenca autoimune muito pre-valente, que afeta aproximadamente 1% da populagao nos países desenvolvidos; as mulheres sao mais frequentemente afetadas do que os homens (aproximadamente Sil).1 Nessa doenca, as articulares sao o principal alvo de ataque, com grande tendencia a destruicao das articulares e, consequen-temente, a déficits em todos os aspectos da qualidade de vida.2 As causas exatas da doenca sao desconhecidas, mas fatores ambientais e predisposicao genética estao envolvidos. Embora esses fatores nao sejam suficientes para o desenvolvimento da doenca, podem desempenhar um papel na heterogeneidade do quadro clínico e na resposta ao tratamento e ser o alvo de agentes terapéuticos. Formas polimórficas do gene metileno-tetrahidrofolato redutase (MTHFR) e alguns genes de citocinas tem sido estudados como possíveis marcadores da suscepti-bilidade, gravidade e/ou protecao na AR.3
O C677T (Ala 222 Val) e o A1298C (Glu 429 Ala) sao dois polimorfismos genéticos comuns do gene MTHFR. Ambos estao associados a diminuicao na atividade da enzima 5, 10 metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR), com menor grau para o polimorfismo A1298C em comparacao com o C677T.4 Essa enzima é responsável pela síntese de metilenotetrahi-drofolato, necessária para a síntese de purina e pirimidina e regeneracao da metionina a partir da homocisteína.5 A diminuicao na atividade dessa enzima resulta em níveis elevados de homocisteína, que sao comumente encontrados em pacientes com artrite reumatoide (AR) e sao parcialmente res-ponsáveis pela alta taxa de complicares cardiovasculares nesses indivíduos.6
O fator de crescimento transformador 01 (TGF-01) é um fator de crescimento que regula a proliferacao celular, a
cicatrizacao de feridas e a angiogenese de um modo específico a célula.7 Está presente em abundancia em articulares reumatoides e tem uma funcao anti-inflamatória, porque a sobre-expressao desse gene reduziu a artrite em um modelo animal.8 Indivíduos com polimorfismos nas regioes de codificacao e regulacao do TGF-p 1 tem uma maior pro-pensao a desenvolver transtornos imunes. O polimorfismo TGF-01 (T869C) afeta os níveis séricos de TGF-01 e é usado como marcador para o aumento no risco de doenca em várias enfermidades.9
As citocinas desempenham um papel importante na pato-genese da AR e seus processos inflamatórios associados e destruicao articular. Isso ocorre principalmente por meio do desvio do equilíbrio para níveis mais elevados de citocinas pró--inflamatórias a custa de citocinas anti-inflamatórias. Assim, a concentracao de membros da superfamília pro-inflamatória TNF-a está diretamente correlacionada com a patologia da doenca.10 O TNF-a é uma potente citocina pró-inflamatória produzida principalmente por macrófagos. É considerado um dos principais mediadores inflamatórios da inflamacao e destruicao articular na AR ao induzir outras citocinas infla-matórias e estimular a expressao de moléculas de adesao pelos fibroblastos.11 A linfotoxina-a (LT-a), outro membro da superfamília do TNF anteriormente conhecida como fator de necrose tumoral-0 (TNF-0), induz a apoptose celular e a res-postas inflamatórias após a ligacao ao receptor de TNF tipos 1 e 2, respectivamente.12 Detectou-se um polimorfismo de nucleotídeo único (A252G) no primeiro intron do gene LT-a e relatou-se que esse aumenta a expressao do nível plasmático de LT-a.13 Os dois alelos resultantes desse polimorfismo de nucleotídeo único sao designados LT-a (10,5 kb) e LT-a (5,5 kb). O alelo LT-a (5,5 kb) está associado a níveis plasmáticos mais elevados de LT-a, malignidades linfoides e a um pior desfecho de doencas autoimunes.14
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Outro membro da familia TNF é o fator ativador de linfócitos B (BAFF), que pode se ligar a linfócitos B, estimular a sua proliferacao e promover a sua sobrevivencia e, consequentemente, ajudar na regulacao da resposta imune inata e adaptativa. Observou-se uma desregulagao do BAFF em pacientes com doencas autoimunes como a artrite reumatoide.15 A osteopontina (OPN) também é uma cito-cina pró-inflamatória que tem efeitos imunorreguladores em doencas autoimunes e pode estar envolvida na patogenese da AR.16
O objetivo deste estudo é detectar o padrao de polimorfismo do gene MTHFR dos tipos (C677T) e (A1298C), TGF-01 (T869 C) e LT-a (A252G) em pacientes com artrite reumatoide egipcios e se há alguma correlacao daqueles padroes com a atividade da doenca e os niveis séricos de TNF-a, BAFF e oste-opontina.
Amostra e métodos
Selegao da amostra
Trata-se de um estudo observational transversal comparativo que foi feito na Unidade de Reumatologia Kasr Al Aini da Faculdade de Medicina da Universidade do Cairo, de maio a dezembro de 2013. O estudo foi feito de acordo com os principios da Declaracao de Helsinque e foi aprovado pelo comité de ética local da Faculdade de Medicina da Universidade do Cairo.
Foi obtido um consentimento informado por escrito de todos os participantes, depois de se explicarem a finalidade e a natureza da pesquisa. Foram incluidos 104 pacientes com artrite reumatoide (16 homens e 88 mulheres) e 90 indiví-duos saudáveis de idade e sexo correspondentes que atuaram como controle. Os pacientes estavam em tratamento regular com fármacos anti-inflamatórios nao esteroides (Aine) (n = 42), metotrexato (n = 88), prednisona (n = 24), leflunomida (n = 32) e hidroxicloroquina (n=56). Os pacientes eram tratados com diferentes combinacoes dos fármacos anteriores. Fizeram-se uma anamnese completa e exame físico de todos os pacientes e calcularam-se o escore de atividade da doenca em 28 articulares (DAS-28) e a pontuacao total do Health Assessment Questionnaire (HAQ).
Exames laboratoriais
Mensuraram-se os niveis séricos de BAFF, OPN e TNF-a com kits de Elisa obtidos da R&D Systems, Minneapolis, MN para os dois primeiros e da AviBion, Helsinki, Finlandia para o TNF-a, de acordo com o protocolo do fabricante.
Análise molecular
Extragao de DNA
O DNA genomico foi extraido do sangue periférico com o minikit QIAamp DNA (Qiagen, Valencia, CA, EUA), de acordo com o protocolo do fabricante. A genotipagem foi feita por reacao da polimerase em cadeia - polimorfismo no comprimento de fragmentos de restricao (PCR-RFLP).
Genotipagem do MTHFR A1298C17
Usou-se um conjunto de primersforward "5'-TGG CTT GGA GCT GAA GGA CTA C-3" e reverse "5'-CAC TTT GTG ACC ATT CCG GTT TG-3" para a amplificacao de um fragmento de 241 pares de bases; em seguida, o fragmento amplificado foi digerido pela enzima MbolI. O perfil de PCR foi: desnaturacao inicial a 95 °C durante 5 min, seguido por 35 ciclos de 30 segundos cada a 94°C, 51 °C e 72 °C, depois durante 10 min a 72 °C. O genótipo AA produz duas bandas de 211 e 30 bp, o genótipo CC produz uma banda única de 241 bp (nao dividida), e os genótipos AC produzem tres bandas de 241, 211 e 30 bp.
Genotipagem do MTHFR C677T18
Usou-se um conjunto de primersforward "5'-CAT CCC TAT TGG CAG GTT AC-3" e reverse "5'-GAC GGT GCG GTG AGA GTG-3" para a amplificacao de um fragmento de 198 pares de bases; em seguida, os fragmentos amplificados foram digeridos pela enzima Hinfl. O perfil de PCR foi: desnaturacao inicial a 94°C durante 5 min, seguido por 35 ciclos de 30 segundos cada a 94°C, 61 °C e 72°C e uma extensao final a 72°C durante 5min. O genótipo CC selvagem foi identificado por um fragmento único de 198 bp, o genótipo (TT) pelos fragmentos de 175/23 bp e o genótipo heterozigoto (CT) pelos fragmentos de 198, 175 e 23 bp.
Genotipagem dos genótipos TGF-/31 T869C19 Usou-se um conjunto de primers forward "5'-TTCCCTCGAGG-CCCTCCTA-3" e reverse "5'-GCCGCAGCTTGGACAGGATC" para a amplificacao de fragmentos de 294bp do gene TGF-01. Os produtos da PCR foram entao digeridos pela enzima MspA1I. O perfil de PCR foi: desnaturacao a 96 °C durante 10 minutos, seguido por 35 ciclos de 75 segundos cada a 96 °C, 62 °C e 72 °C, e uma extensao final a 72°C durante 5 min. O alelo T resultou em quatro fragmentos de 161, 67, 40 e 26 bp. O alelo C resultou em fragmentos de 149, 67, 40, 26 e 12 bp.
Genotipagem do LT-a (A252 g)20
Um fragmento de 782 bp do intron 1 (+252A/G) do gene LT--a foi amplificado por PCR com um conjunto de primers: (forward) "5'-AGAGGGGTGGATGCTTGGGTTC-3" e (reverse) "5'--CCGTGCTTCGTGCTTTGGACTA-3". Os produtos da PCR foram digeridos pela enzima de restricao NcoI. O alelo G produz um fragmento único de 782 bp (nao digerido). O alelo G é digerido em bandas de 586 bp e 196 bp. O perfil de PCR foi: incubacao durante 5 minutos a 95 ° C, seguido de 35 ciclos de 1 min a 95 ° C, 1min a 52°C e 1min a 72°C, com uma extensao final a 72°C durante 7 min.
Análise estatística
Usou-se o programa Statistical Package of Social Science Software (SPSS), versao 19, para analisar os dados. Os dados foram resumidos com a frequencia e a percentagem para os dados qualitativos ou média e desvio padrao para os quantitativos. A análise de qui-quadrado foi usada para testar o desvio da distribuido dos genótipos do equilibrio de Hardy-Weinberg. A comparacao entre pacientes e controle saudáveis foi feita por meio do teste de qui-quadrado ou teste exato de Fisher para dados qualitativos e teste t de Student e análise de variancia para os quantitativos. Usou-se a análise
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Tabela 1 - Características dos pacientes
Parametros Min Max Média i DP
Idade (anos) 22,0 70,0 42,7 i 12,1
Durafáo da doenca (meses) 6 216 66,7 i S2,S
Rigidez matinal (min) 3,0 120,0 29,9 i 38,2
Número de articulares inchadas 0,0 18,0 3,3 i S,S
Número de articulares dolorosas 0,0 20,0 S,0 i S,9
VHS S 12S,0 36,4 i 36,0
DAS-28 1,4 7,7 3,9 i 1,6
Curva ROC
de regressao bivariada para detectar a associaçao entre as diferentes formas genéticas polimórficas e a doenca. A análise da curva Receiver Operating Characteristics (ROC) foi feita para explorar a capacidade de discriminacao da osteopontina e TNF em pacientes com AR. Valores de p inferiores a 0,0S foram considerados estatisticamente significativos.
Resultados
As características dos pacientes, incluindo idade, duracao da doenca, mamfestacбes clínicas, atividade da doenca e VHS sao mostradas na tabela 1.
A comparaçao entre os níveis séricos de osteopontina, BAFF e TNF-а (expressos como a média i DP) em pacientes e controles mostrou que os níveis séricos de OPN e de TNF-а foram significativamente maiores nos pacientes em comparacao com os controles (p < 0,001). O nível sérico de BAFF nao apresentou diferença estatisticamente significativa entre pacientes e controles (p = 0,6) (tabela 2).
Ao comparar a capacidade do TNF, da osteopontina e do BAFF de discriminar os controles dos pacientes com artrite reumatoide, a curva ROC mostrou que o TNF-а tem uma maior capacidade de discriminacao do que a OPN, com sensibilidade (94,2%) e especificidade (84,4%) no valor de ponto de corte de 1S,2 pg/mL. Por outro lado, a OPN tem sensibilidade (71,2%) e especificidade (S3,3%) no valor de ponto de corte de S,7 ng/mL, tal como calculado pela curva ROC (fig. 1).
Os resultados deste estudo mostraram que as frequéncias genotípicas de todos os casos estudados estavam em equi-líbrio de Hardy-Weinberg para o MTHFR C677T e A1298C e TGF-ß1 T869C. Quanto ao LT-а A2S2G, as frequéncias genotí-picas estavam em equilíbrio de Hardy-Weinberg somente no grupo controle.
Analisou-se a associaçao entre a artrite reumatoide e diferentes formas polimórficas do MTHFR C677 T, MTHFR A1298 C, TGF-ß1 T869C e LT-а A2S2G (tabela 3). Os resultados dessa análise mostraram uma associaçao estatisticamente significativa entre a artrite reumatoide e o genótipo CT, alelo T do MTHRF C677 T e genótipo GG e alelo G do LT-а A2S2G. Por outro
1 - especificidade
Osteopontina TNF Linha de referência
Figura 1 - Curva ROC que mostra a capacidade de TNF, osteopontina e BAFF de discriminar os controles dos pacientes com artrite reumatoide.
lado, o genótipo AC do MTHFR A1298 C mostrou um efeito pro-tetor para a doenca, quando comparado com o genótipo AA selvagem. Além disso, nao foi detectada associacao estatisticamente significativa entre as diferentes formas polimórficas do polimorfismo T869 C do gene TGF-ß1 e a artrite reumatoide (tabela 3).
O HAQ total nao apresentou qualquer associaçao com diferentes formas polimórficas do polimorfismo MTHFR C677T (x2 = S,S, p = 0,06), MTHFR A1298C, (x2 = 2,26, p = 0,32), TGF--ß1 T869C (x2 = 1,31, p = 0,S2) ou LT-а (x2 = 1,1, p = 0,S7). Além disso, a atividade da doenca, conforme mostrada pelo DAS-28, nao esteve associada a formas polimórficas de qualquer dos genes examinados - MTHFR C677T (x2 = 0,4 p = 0,81), MTHFR A1298C (x2 = 0,69, p = 0,7), TGF-ß1 T869C (x2 = 4,27, p = 0,12) e LT-а (x2 = 4,S4, p = 0,1).
Descobriu-se que os níveis séricos de TNF-а diferem significativamente nas diferentes formas polimórficas de todos os genes testados, com excecao do MTHFR A1298C, como mostrado na tabela 4. O teste post hoc mostrou que o TNF--а sérico é significativamente maior no genótipo CT do que no genótipo CC do MTHFR C677 (p = 0,009), no genótipo CT do que no genótipo TT do TGF-ß1 T869C (p = 0,00S), no genó-tipo GG quando comparado com o genótipo AA (p = 0,008) e genótipo AG (p = 0,00S) do LT-а A2S2G. Nao há diferencia esta-tisticamente significativa nos níveis séricos de OPN e BAFF nos diferentes genótipos dos genes examinados (tabela 4).
Tabela 2 - Comparacáo entre os níveis séricos de osteopontina, BAFF e TNF-a (expressos como a média ± desvio padráo) em pacientes e controles
Pacientes (n = 104) Controles (n = 90) p
Média i DP Média i DP
Osteopontina (ng/mL) BAFF (pg/mL) TNF-а (pg/mL)
12,9 i 10,6 S,9 i 2,S < 0,001
474,S i 1S1,1 489,7 i 14S,6 0,6
36,0 i 14,3 8,9 i 6,3 < 0,001
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Tabela 3 - Associaçâo entre a artrite reumatoide e diferentes formas polimórficas de MTHFR C677 T, MTHFR A1298 C, TGF-ß1 T869C e LT-a A252G
Genotipo Pacientes Controles p OR (IC 95%)
e alelo
n % n %
MTHRF C677T CC 46 44,2 64 71,1
CT 50 48,1 22 24,4 0,011 3,16 (1,30-7,69)
TT 8 7,7 4 4,4 0,260 2,78 (0,47-16,5)
C 142 68,3 159 83,3
T 66 31,7 30 16,7 0,028 2,18 (1,09-4,38)
MTHFR A1298C AA 46 44,2 20 22,2
AC 34 32,7 56 62,2 0,006 0,26 (0,10-0,69)
CC 24 23,1 14 15,6 0,629 0,75 (0,23-2,45)
A 126 60,6 96 53,3
C 82 39,4 84 46,7 0,383 0,74 (0,42-1,32)
TGF-ß1 T869C TT 18 17,3 20 22,2
CT 68 65,4 36 40,0 0,173 2,10 (0,72- 6,10)
CC 18 17,3 34 37,8 0,390 0,59 (0,18-1,97)
C 104 50% 104 58%
T 104 50% 76 42% 0,313 0,73 (0,41-1,29)
LT-a A252G AA 6 5,8 16 28,9
AG 42 40,4 48 17,8 0,252 2,33 (0,55-9,95)
GG 56 53,8 26 53,3 0,021 5,74 (1,31-25,26)
A 54 26 80 44
G 154 74 100 56 0,007 2,28 (1,25-4,18)
Tabela 4 - Comparacao entre os níveis séricos de osteopontina, TNF-a e FABF nos diferentes genotipos em todos os
casos estudados (n = 194)
Osteopontina sérica (ng/mL) TNF sérico (pg/mL) BAFF sérico (pg/mL)
Genotipo Média ±DP p Média ± DP p Média ± DP p
MTHFR C677T CC 8,32 ± 7,75 0,248 19,20 ±15,076 0,031 505,16 ± 149,65 0,162
CT 11,24 ± 9,92 28,93 ±19,817 444,67 ± 133,17
TT 11,62 ±7,91 25,62 ± 16,080 486,83 ± 197,19
MTHFR A1298C AA 12,27 ± 11,30 0,076 23,61 ± 16,05 0,233 486,49 ± 136,9793 0,233
AC 7,79 ± 6,00 20,58 ± 18,17 480,98 ± 157,43
CC 9,293 ± 8,00 28,75 ± 17,85 474,47 ± 151,22
TGF-ß1 T869C CC 6,79 ±5,99 0,151 22,17 ± 11,99 0,018 518,42 ± 164,63 0,137
CT 10,54 ±8,66 27,09 ± 19,39 482,25 ± 139,42
TT 10,91 ± 11,07 14,04 ± 15,32 429,32 ± 139,09
LT-a A252G AA 14,99 ± 16,98 0,075 14,43 ± 3,62 0,004 525,27 ± 174,13 0,542
AG 9,44 ± 7,86 19,35 ± 15,45 469,87 ± 135,90
GG 8,35 ± 5,53 29,82 ±19,66 482,71 ± 155,02
Discussáo
Embora a etiología da AR permanecía pouco clara, fatores de susceptibilidade - que incluem fatores ambientais e genéticos - sao evidentes. Os fatores genéticos constituem cerca de 50% desses fatores.3 As citocinas pró-inflamatórias amplificam o processo inflamatório e a destruicao das articulares reuma-toides. O fator de necrose tumoral, a osteopontina e o BAFF estao entre essas citocinas.3
Neste estudo, os níveis séricos de TNF-a foram significativamente mais elevados em pacientes em comparacao com os controles. Os resultados referentes ao TNF-a coincidem com os resultados de estudos anteriores, como os de Gheita et al. 21 e Ismail et al.;22 esses autores explicaram os resultados por seu papel vital e central na etiologia e patogenese da AR, daí os inibidores do TNF terem sido os primeiros fármacos biológicos antirreumáticos modificadores da doenca (DMARD) a ser
aprovados para o tratamento da AR. Esses medicamentos sao agora parte do tratamento de rotina dos pacientes com essa doenca.23 No entanto, Ebrahimi et al.24 relataram um aumento nao significativo nos níveis séricos de TNF-a em pacientes quando comparados com os controles.
Além disso, nossos resultados mostraram um aumento significativo nos níveis séricos de OPN em pacientes com AR em comparacao com o grupo controle saudável; isso concorda com os achados de Ji et al.25 e Chen et. al.,26 que explicaram esses resultados pelo papel fundamental da OPN e seus receptores na patogenese da AR. Assim, vários estudos experimentais com o objetivo de usar a OPN como alvo terapéutico estao sendo feitos e os desfechos desses resultados sao promissores.27
Por outro lado, os níveis séricos de BAFF nao mostra-ram diferenca estatisticamente significativa entre os dois grupos, o que concorda com os resultados encontrados previamente por Eldin et al.28 No entanto, Mahdy et al.29
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e Moura et al.30 relataram um aumento significativo nos níveis séricos de BAFF entre pacientes com AR, em especial naqueles com maior atividade da doenca e duracao da doenca mais curta. Essa discrepancia de resultados pode ser atribuida a diferente atividade e duracao da doenca no grupo estudado.
O genotipo CT e o alelo T do MTHFR C677T estao associ-ados a AR e a um nivel sérico superior de TNF-a, mas nao tém efeito significativo sobre os níveis séricos de OPN e BAFF. Por outro lado, as diferentes formas polimórficas do MTHFR A1298 C nao estiveram associadas a AR ou aos níveis séricos de TNF-a, OPN ou BAFF. O genotipo AC do MTHFR A1298 C mostrou efeito protetor para a doenca. Isso pode ser decor-rente do maior efeito do MTHFR C677 T na enzima MTHFR, que resulta em hiper-homocisteinemia e subsequente ativacao da cascata de citocinas. Os resultados de estudos prévios foram heterogéneos; alguns nao mostraram associacao entre o risco de AR e as diferentes formas polimórficas do MTHFR C677 T e A1298C.31,32 Outros relataram associacao do alelo T, mas nao de alguma das formas polimórficas do MTHFR C677T com a AR.3 Rubini et al.33 relataram uma associacao entre o genotipo CC do MTHFR A1298 C, mas nao de alguma das formas polimórficas do MTHFR C677 T com a suscetibilidade a AR na populacao italiana. Essa heterogeneidade de resultados pode ser atribuida as variacoes étnicas nas frequéncias alélicas e genotípicas, conforme relatado por Hughes et al.;32 esses autores encontraram um aumento significativo no alelo T do MTHFR C677T e no alelo C do MTHFR A1298C (inde-pendentemente do status de doenca) em brancos quando comparados com negros americanos. Além disso, foi descrita uma interacao significativa entre os polimorfismos MTHFR e fatores nutricionais/ambientais (ou seja, níveis de folato, idade, tabagismo e ingestao de álcool).4 O fator de crescimento transformador 01 (TGF-01) é uma citocina anti-inflamatória associada a remissao da doenca; além disso, tem o potencial de ser uma citocina pró-inflamatória. Relatou-se que polimorfismos do TGF-01 estao associados a variacoes nos níveis séricos de TGF-01 e a diversas doencas.34 Neste estudo, os genotipos do TGF-01 (T869C) nao estiveram associados a AR. No entanto, o genotipo CT esteve associado a um aumento significativo no TNF sérico quando comparado com o genó-tipo TT. Isso vem associado aos resultados de dois estudos de metanálise feitos por Zhang et al.35 e Chang et al.,36 que nao mostraram associacao clara do polimorfismo T869 C e alelo T do TGF-01 com a AR em uma populacao mundial; contudo, foi sugerida associacao apenas nas pessoas de ascendéncia asiática. Os resultados de Hussein et al.37 foram diferentes; eles encontraram associacao do alelo T do TGF-01 com a suscepti-bilidade a AR em pacientes egípcios. Os resultados do presente estudo também mostraram associacao do alelo G e do genotipo GG do LT-a A252G com a AR e níveis séricos mais elevados de TNF-a. Esses resultados concordam com os achados de Karray et al.38 e Al-Rayes et al.,39 que relataram associacao entre os genotipos GG e AA com a AR, enquanto o genotipo GA foi refratário.
Do exposto, pode-se concluir que o genotipo CT do MTHFR C677T, o genotipo AC do MTHFR A1298C e o genotipo GG do LT-a A252G estao associados a um risco aumentado de AR em pacientes egípcios.
Que se tem conhecimento, este é o primeiro estudo a ava-liar, simultaneamente, a associacao entre os polimorfismos MTHFR C677T e A1298C, TGF-01 T869C e LT-a A252G com a AR e com as citocinas pró-inflamatórias TNF, BAFF e OPN em pacientes egípcios.
Este estudo apresenta algumas limitacoes, como a inclusao de um grupo muito amplo de pacientes quanto a duracao da doenca, atividade da doenca e fármacos usados pelos pacientes, além de nao fazer qualquer mencao a positividade do fator reumatoide e anti-CCP. Os níveis de citocinas podem variar amplamente com esses fatores e também com outros detalhes metodológicos, como o tempo entre a amostra ser coletada e processada, a pontuacao no DAS-28, os fármacos usados e suas doses quando as amostras sao coletadas.
Conflitos de interesse
Os autores declaram nao haver conflitos de interesse. referencias
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